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Cristallographie de deux enzymes : mutant de l'uridine monophosphate kinase d' E. coli insensible à la régulation allostérique et la cytokinine oxydase

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par Ahmed Meksem
Institut National Agronomique Paris Grignon - Master en Nutrition Santé 2006
  

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Sommaire

A- Introduction .................................................................................................... 7

I)-L'uridine monophosphate kinase d'Escherichia coli (UMPKeco)................................................. 12

A- Les NMPK........................................................................................................... 12

1- Définition et Rôles biologiques.............................................................................. 12

2-Structures 3D..................................................................................................... 14

B-L'UMPKeco .......................................................................................................... 14

1-Une NMPK atypique ........................................................................................... 13

2-Structures 3D et propriétés catalytiques..................................................................... 13

3-Rôles ............................................................................................................ 17

4- Contexte et objectifs du stage................................................................................. 17

II)-La Cytokinine oxydase de maïs........................................................................................ 19

A-Les cytokinines......................................................................................................... 19

1. Nature chimique .............................................................................................. 19

2. Lieu de synthèse................................................................................................ 19

3. Rôles............................................................................................................ 19

B-La CKOm............................................................................................................... 21

1. Propriétés et Structure 3D................................................................................... 21

2. Objectifs du stage ............................................................................................. 21

III)-La cristallogénèse des protéines .........................................................................................23

A-Aspects généraux...................................................................................................... 23

1. Le cristal............................................................................................................ 23

2. Principes de la cristallogenèse................................................................................. 23

3. Etapes de la cristallisation....................................................................................... 25

B-Méthodes de cristallisation.......................................................................................... 27

B-Matériel et méthodes .......................................................................................... 28

1. Clonage, surexpression et purification.......................................................................... 28

2. Cristallisation...................................................................................................... 28

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3. Etapes ultérieures................................................................................................ 31

C-Résultats et discussion....................................................................................... 34

A)-Mutant D93A non régulé par le GTP de l'UMPKeco .............................................................. 34

B)-CKOm native et mutant D169E....................................................................................... 37

D- Projets......................................................................................................... 41

Références bibliographiques................................................................................................ 42

Annexes........................................................................................................................ 44

Résumé........................................................................................................................ 46

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