Chapitre 2. Profil de résistance aux antibiotiques des
Salmonella et Shigella isolés
La méthode des disques ou technique de Kirby Bauer en
milieu gélosé a été également
utilisées pour la réalisation de l'antibiogramme.
2.1 Méthode de diffusion
en milieu gélosé
La méthode de test de sensibilité
utilisée est celle de la diffusion en gélose MH (méthode
des disques ou technique de Kirby Bauer) selon la technique recommandée
par le Comité d'Antibiogramme de la Société
Française de Microbiologie (CASFM, 2022). L'épaisseur de la
gélose était de 4 mm, ce qui correspond à un volume de 25
ml pour une boite de Pétri (Ø 90 mm). L'antibiogramme a
été réalisé à partir d'une souche pure,
isolée sur gélose MH ou en culture pure. Cette méthode est
basée sur le fait, lorsqu'un antibiotique est déposé sur
la surface d'un milieu gélosé en un point donné, il
diffuse en établissant un gradient de concentration inversement
proportionnelle au diamètre de l'antibiotique. L'inoculum a
été suffisamment dilué et comparé avec le standard
des turbidités Mc Farland 0,5, qui est la densité optimale de
sorte qu'après culture sur milieu de Mueller-Hinton il ait la formation
de colonies toutes isolées mais jointives.
Dans les 15 minutes suivantes l'ajustement de la
turbidité de la suspension d'inoculum, il a été
trempé un écouvillon de coton dans la suspension.
L'écouvillon trempé a été pressé fermement
en le tournant contre la paroi inférieure du tube juste au-dessus du
niveau du liquide pour enlever l'inoculum excédentaire. Ensuite, il a
été étalé à trois (3) reprises sur la
surface entière de la gélose, en tournant la boite à
environ 60 °, après chaque application, pour obtenir une
distribution égale de l'inoculum. Enfin partout du bord de la surface de
la gélose a été écouvillonné.
2.2 Les disques
d'antibiotiques
Tous les disques utilisés ont été fourni
par la maison bioMérieux (réf: 55561 ; lot : 102014010). Les
antibiotiques utilisés pour l'antibiogrammes proviennent des disques Bio
Mérieux, disques Pasteur, Rosco et Difco, Bio Rad et DebenDiangosticsLt.
Les antibiotiques sont issus des familles suivantes :
Béta-lactamines (Pénicillines et Céphalosporine),
Phénicolés, Cyclines, Sulfamides, Polypeptides et Quinolones.
Des disques de papier buvard de 6,35 mm de diamètre
imprégnés d'une charge déterminée en antibiotique
ont été utilisés pour les tests d'antibiogramme. 5
à 10 min après l'inoculum, les disques d'antibiotiques ont
été appliqués sur les boites de Pétri. Les disques
ont été placés individuellement avec des pinces
stériles ou à l'aide d'un distributeur contre la gélose.
Le nombre des disques par boites de Pétri doit être tel que les
zones d'inhibition ne se coupent pas afin de permettre la lecture des
diamètres dans plusieurs directions. Le nombre des disques choisi varie
entre 6 à 7 par boite de 90 millimetres. Une fois que les disques ont
été placés sur la gélose, elles sont
laissées à la température du laboratoire (25 ° C)
pendant environ 30 minutes puis ils sont portés à l'incubation
pendant 24 heures à 37 ° C. Après une nuit d'incubation. La
mesure du diamètre de chaque zone d'inhibition (diamètre du
disque compris) en mm a été faite à l'aide d'un instrument
de mesure gradué appelé pied de coulisse ou d'une règle
graduée. La technique de disposition de disques d'antibiotiques est
représentée par le schéma suivant :
Figure 18 : Technique de disposition des disques
d'antibiotiques
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