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Clonage et expression de la protéine CFP10 de Mycobactérium Tuberculosis dans Pichia Pastoris

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par Bilel Masmoudi
INSAT - Ingénieur 2006
  

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I.3) Les enzymes.......................................................................26

I.3.1) Les enzymes de restrictions...............................................26

I.3.2) Les autres enzymes.........................................................26

I.4) Les marqueurs de poids moléculaires..........................................27

I.4.1) Les marqueurs de poids moléculaires d'ADN.........................27

I.4.2) Les marqueurs de poids moléculaires de protéines....................28

I.5) Les oligonucléotides..............................................................28

I.6) Autres matériels...................................................................28

II) Méthodes

II.1) PCR.................................................................................29

II.2) Electrophorèse sur gel d'agarose...............................................29

II.3) Purification d'ADN sur gel d'agarose.........................................30

II.4) La digestion.......................................................................30

II.5) La ligation........................................................................31

II.6) Transformation des bactéries...................................................31

II.7) Colonie PCR.....................................................................32

II.8) Préparation des plasmides......................................................32

II.8.1) Préculture bactérienne....................................................32

II.8.2) Extraction de l'ADN plasmidique.......................................32

II.9) Eléctroporation de la levure Pichia pastoris..................................33

II.10) Production de la protéine recombinante dans Pichia pastoris............33

II.11) Electrophorèse des protéines sur gel polyacrylamide en présence de

SDS..............................................................................34

II.12) Immunoblot et révélation par ECL................................................35

C] Résultats et interprétation

I. Clonage du gène Rv3874 dans le vecteur pPICZáA........................................37

 

I.1) Stratégie de clonage...............................................................37

I.2) PCR..................................................................................38

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