Détermination "in vitro " du pouvoir antibactérien des huiles essentielles d'eucalyptus, myrte, clous de girofle et sarriette, et leur application à la conservation de la viande fraà®che type hachée.

3.6.3- Préparation des échantillons

Pour chaque combinaison de paramètres étudiés (H.E. + bactérie pathogène), 200 grammes (g) de viande hachée ont été préparés dans un récipient Inox stérile et ensuite mélangés avec de l'H.E. donnée. Ensuite, la viande contenant de l'H.E. a été inoculée par la bactérie pathogène correspondante (? 5 log ufc/g). L'ensemble a été homogénéisé à l'aide d'un homogénéisateur pour bien répartir la distribution de l'huile et de la bactérie à travers la viande. Au total trois (03) échantillons de 50 g chacun ont été préparés pour chaque combinaison (cf. figure 24). Les échantillons sont ensuite placés dans des boîtes de conserve Inox stériles de 6 cm de ? (03 boîtes/germe/H.E.) et conservés à une T° de réfrigération: 2#177;1 °C.

Les échantillons témoins (contrôles) ont été traités avec de l'eau distillée stérile en présence de la souche pathogène et, conservés dans les mêmes conditions (cf. figure 23 étape II).

- Dessin expérimental du test sur la viande fraîche

Étape I :

Viande + HE + Bactéries

Syzygium
aromaticum

E. coli

Eucalyptus
sp.

Satureja
hortensis

E. coli

S. paratyphi A. S. aureus

S. paratyphi A

S. aureus Shigella flexneri

3 échantillons pour chaque espèce bactérienne

Étape II :

Viande + Bactéries

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Salmonella paratyphi A

Shigella flexneri

3 échantillons 3 échantillons 3 échantillons 3 échantillons

Fig. 23: Schéma du test de l'activité antibactérienne des H.E. sur une viande contaminée
par les souches pathogènes.

Fig. 24: Test de l'effet des H.E. sur la conservation de la viande hachée. 3.6.4- Analyses Microbiologiques

Pour déterminer l'efficacité inhibitrice des H.E. sur les bactéries pathogènes présentes dans la viande, des analyses microbiologiques sont effectuées pour suivre la cinétique microbienne de chaque espèce en présence et en absence d'H.E. Toutes les analyses ont été réalisées en duplicata.

La cinétique microbienne de chaque espèce a été mesurée au 1^er , 4^ème et 7^ème jour pendant une durée globale de conservation de sept (07) jours. Les échantillons ont été conservés à 2#177;1 °C à l'air libre. Pour chaque prélèvement, 25 g de viande de chaque échantillon étudié sont placés puis dilués dans 225 mL d'eau peptonée (0.1%). Chaque échantillon est homogénéisé à l'aide d'un stomacher Lab Blender (model BA 6021; Seward Laboratory, London, UK) pendant 1 minute. Des dilutions décimales sont préparées par dilution de 1 mL dans 9 mL d'eau peptonée stérile (0.1%). Deux boîtes de pétri sont ensemencées pour chaque dilution en

versant 1 mL de chaque suspension dans de la gélose en surfusion, chaque germe a été ensemencé sur son milieu sélectif:

Le dénombrement de S. paratyphi A et d'E. coli a été déterminés en comptant les boîtes dans un milieu Hektoen (Himedia Laboratories Pvt. Ltd Mumbai India), incubées à 37 °C pendant 24 h. Celui de S. aureus a été déterminé dans un milieu Chapman (Biomérieux^® SA- France) incubées à 37 °C pendant 48 h, et S. flexneri a été dénombrée dans un milieu SS (Himedia Laboratories Pvt. Ltd. Mumbai India) incubées à 37 °C pendant 24 h. Le nombre de bactéries est exprimé en _Log10 d'unité formant colonie/g (Log ufc/g).