B) Evaluation de la résistance à
Moniliophthora perniciosa
- Clones de cacaoyers à
tester
Il s'agira des mêmes clones que ceux utilisés lors
des tests de résistance à Phytophthora spp. Les
témoins seront les clones SCA 6 (résistant) et ICS 46
(sensible).
5 greffes seront nécessaires par clone. Les plants devront
être âgés de 6 à 8 mois lors des inoculations.
- Matériel fongique : souches de M. perniciosa
- En début de petite saison des pluies (novembre),
récolter des balais-de-sorcière secs non
détériorés sur Theobroma cacao et T.
grandiflorum.
- Désinfecter les balais en les trempant dans une solution
d'hypochlorite de sodium (30 minutes, 0,5 % de chlore).
- Pendre les balais dans une unité de production de
basidiocarpes et faire alterner des périodes humides et des
périodes sèches pour stimuler la production de basidiocarpes.
- Les basidiocarpes seront récoltés
délicatement et placés au dessus d'un bécher contenant une
solution de glycérol 16 % / MES4 0,01M / Tween 0,01% à
pH 6,1. La libération des spores a lieu de nuit.
- Le lendemain matin, évaluer la concentration en
spores à l'aide d'une cellule de comptage et vérifier le taux de
germination sur milieu de culture "eau gélosée" (4 heures
après ensemencement). Calibrer la suspension pour une utilisation
immédiate ; sinon, la récupérer dans des cryotubes (1,8 -
2 ml) qui seront stockés dans l'azote liquide jusqu'à
l'utilisation ultérieure.
- Inoculation, incubation, notation des
symptômes
La méthode d'inoculation proposée est une
adaptation de celle développée par SurujdeoMaharaj et
al. (2003).
4 MES = acide
2-morpholinoéthanesulfonique-1-hydrate ; PM = 195,24
- Environ 2 semaines avant la date d'inoculation prévue,
tailler les plants afin d'induire la formation de pousses
végétatives synchrones.
- Sortir les cryotubes de l'azote liquide et les faire
dégeler au bain-marie (30°C) quelques minutes.
- Inoculer chaque bourgeon à l'aide d'une goutte
gélosée d'inoculum, au stade "Flush 2", tel que décrit
dans Greathouse et al. (1971), à une concentration à
préciser localement.
- Incuber en atmosphère saturée en humidité
(chambre d'incubation) à une température d'environ 24-26°C
pendant 48 heures.
- Après la période d'incubation, les plants seront
remis en pépinière, sous ombrière.
- La première variable analysée sera la "date
d'apparition du premier symptôme" : pour cela, chaque bourgeon sera
observé quotidiennement pendant les quatre premières semaines
afin de détecter l'émergence des symptômes. Ensuite, pour
les plants résistants, les observations seront faites tous les 15
jours.
- La deuxième variable analysée sera le
"diamètre maximal du balai à sa base" : pour cela, la base du
balai sera mesurée au pied-à-coulisse une fois par semaine
jusqu'à obtention du diamètre maximal.
- Le pourcentage de bourgeons présentant des
symptômes (gonflement, nécrose, balai) ainsi que le pourcentage de
bourgeons malades ayant développé un balai seront aussi
évalués.
Chaque plant constitue une répétition. Il n'est
prévu qu'une seule série d'inoculation (sur 3 ou 4 jours).
Toutefois, une seconde série sera possible, un an après, sur les
mêmes plants, après plusieurs tailles importantes.
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