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Contribution à  l'évaluation de la qualité physico-chimique et bactériologique de lait cru et diagnostique de brucellose et mammites dans la région de Tlemcen en Algérie

( Télécharger le fichier original )
par Abdelatif Bensalah
Université Abou Bekr Belkaid - Ingénieur d'état en agronomie 2010
  

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4. Analyse bactériologique :

4-1.Dénombrement des coliformes :( totaux et fécaux) :

Le dénombrement des coliformes est effectué sur milieu sélectif solide, le desoxycholate lactose AGR (DLA) (sa composition et donnée en annexes) Milieu de dénombrement des coliformes Il sera incubé à 30°C pour la recherche des coliformes totaux et à 44°C pour la recherche des coliformes fécaux.

Le principe :

Ce milieu contient 1 critère de différenciation : le lactose dont la fermentation est révélé par le rouge neutre. Il contient 2 inhibiteurs des bactéries Gram+ à faible concentration : le désoxycholate (sels biliaires) et le citrate de sodium

Mode opératoire :

1) Préparation de l'eau physiologique :

A/ 9 g de NaCl + 1 l de l'eau distillée B/ Introduire ensuite aseptiquement à l'aide d'une pipette en verre graduée et stérile, 9 ml de l'eau physiologique dans les tubes à essais C/ stérilisé les tubes dans l'autoclave 121 C° pendant 20 minutes

2) préparation et dilution de lait :

A/ Introduire ensuite aseptiquement à l'aide d'une pipette en verre graduée et stérile, 1 ml de lait testé, dans un tube stérile contenant au préalable 9 ml de l'eau stérile. Cette dilution est à 10-1

B/Introduire par la suite 1ml de la dilution 10-1 dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9 ml de l'eau physiologique : cette dilution est à 10-2.

Au moment de la réalisation des dilutions décimales, il est impératif de changer de pipettes entre chaque dilution.

3) Ensemencement :                                  

L'ensemencement se réalisé au boite pétri, chaque boite de pétri est ensemencée par 1 ml de chaque dilution, puis ajouter 15 ml de gélose désoxycholate . Puis mouvementé la boite pétrie sous forme de 8 après laissé les boite de pétri reposé (1h) Puis on tourne les boites.

4) l'incubation :

Les boites sont incubées 36 #177; 1 C° pour les coliformes totaux et 44#177;1C°.

5) Lecture :

Colonies rouges ? bactéries lactose + ? présences des coliformes


                                     

  Photo 06 : des Colonies rouges (les coliformes) après ensemencement

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