4. Analyse bactériologique :
4-1.Dénombrement des
coliformes :( totaux et fécaux) :
Le dénombrement des coliformes est effectué sur
milieu sélectif solide, le desoxycholate lactose AGR (DLA) (sa
composition et donnée en annexes)
Milieu de dénombrement des coliformes Il sera
incubé à 30°C pour la recherche des coliformes totaux et
à 44°C pour la recherche des coliformes fécaux.
Le principe :
Ce milieu contient 1 critère de différenciation
: le lactose dont la fermentation est révélé par le rouge
neutre. Il contient 2 inhibiteurs des bactéries Gram+ à faible
concentration : le désoxycholate (sels biliaires) et le citrate de
sodium
Mode opératoire :
1) Préparation de l'eau
physiologique :
A/ 9 g de NaCl + 1 l de l'eau distillée
B/
Introduire ensuite aseptiquement à l'aide d'une pipette en verre
graduée et stérile, 9 ml de l'eau physiologique dans les tubes
à essais C/
stérilisé les tubes dans l'autoclave 121 C° pendant 20
minutes
2) préparation et dilution de lait
:
A/ Introduire ensuite aseptiquement à l'aide d'une
pipette en verre graduée et stérile, 1 ml de lait testé,
dans un tube stérile contenant au préalable 9 ml de l'eau
stérile. Cette dilution est à 10-1
B/Introduire par la suite 1ml de la dilution 10-1
dans un tube à vis stérile contenant au
préalable 9 ml de l'eau physiologique : cette
dilution est à 10-2.
Au moment de la réalisation des dilutions
décimales, il est impératif de changer de pipettes entre chaque
dilution.
3)
Ensemencement :
L'ensemencement se réalisé au boite
pétri, chaque boite de pétri est ensemencée par 1 ml de
chaque dilution, puis ajouter 15 ml de gélose désoxycholate .
Puis mouvementé la
boite pétrie sous forme de 8 après laissé les boite de
pétri reposé (1h) Puis on tourne les boites.
4) l'incubation :
Les boites sont incubées 36 #177; 1 C° pour les
coliformes totaux et 44#177;1C°.
5) Lecture :
Colonies rouges ? bactéries lactose + ? présences
des coliformes
Photo 06 : des Colonies
rouges (les coliformes) après ensemencement
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