1.3 .1 Enquêtes
Un questionnaire a été élaboré et
émis aux patients ou aux accompagnants (Annexe VII). Les principales
informations collectées étaient : la provenance, le sexe,
l'âge et l'origine possible de la contamination (la source d'eau de
boisson, aliments et le mode de vie de chaque personne admise).
Chaque patient inclus dans l'étude a fait l'objet de
prélèvement des selles dans un flacon stérile.
Matériel de laboratoire
ü Eprouvette graduée : pour mesurer la
quantité d'eau pour faire dissoudre le milieu ;
ü balance électrique : pour la pesée ;
ü plaque chauffante : pour la préparation des
milieux de cultures des bactéries ;
ü Autoclave : pour la stérilisation des milieux
et les verreries à 121 degrés,
ü Hotte de biosécurité : appareil dans
lequel les manipulations se font en toute sécurité ;
ü Portoir : permet d'arranger les tubes ;
ü Bec benzène : il produit de la flamme et permet
de rendre le milieu stérile ;
ü verreries : tubes, erlenmeyer, boites de Pétri,
béchers, pipettes, lames et lamelles,
ü Gants : permet de se protéger ;
ü Lames et lamelles : permettent d'étaler
l'échantillon pour observer au microscope ;
ü Etuve à 37°C ;
· Microscope
optique : permet d'observer les microorganismes ;
ü Vortex (agitateur) : c'est pour
homogénéiser les solutions
Réactifs
Ø Lugol : colorant permettant de marquer les structures
cellulaires au microscope ;
Ø Fushine ;
· L'alcool ;
· Eau de
javel : un antiseptique ;
Ø Milieux de cultures préparés :
Ø L'eau distillée : elle permet de diluer et
d'homogénéiser les solutions ;
Ø RVS (Rappaport Vassilliadis Soja) : milieu
sélectif permettant la croissance des Salmonelles
Ø HKT(Hecktoen) : milieu sélectif
(gélose) pour l'isolement et la différenciation des bacilles
gram(-), milieu permettant le développement des colonies des
salmonella et shigella ;
Ø L'ADN bactérien : a été
extrait de cultures pures de souches Salmonella et shigella
Ø La Rep-PCR : a été
réalisée avec l'amorce universelle (GTG)
(5'-GTGGTGGGTGTGTGTG 3')
Ø Elements de la PCR : tampon de réaction
(Buffer) MgCl2 dNTP Taq polymérase L'appareil thermocycleur pour PCR
H2O bi-distillée et stérile ;
Ø Souches ATCC13076 : Souche de
référence salmonella ;
Ø Électrophorèse des produits PCR :
Un volume de dix microlitres de chaque produit PCR a été
placé dans les puits du gel d'aga- rose ;
Ø L'affiliation phylogénétique : des
souches a été réalisée grâce aux empreintes
génétiques obtenues par rep-PCR.
Matériel de terrain
Le matériel utilisé pour le
prélèvement se compose de :
· Glacière : permettant de transporter les
échantillons au laboratoire ;
· Petits sachets stériles en plastique d'une
contenance de 500g ;
· gants ;
· Marqueur ;
· caches nez ;
· de l'eau distillée ;
· une spatule.
Matériel biologique :
échantillons des selles et sangs permettent d'identifier les
microorganismes
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