3.4.3. Préparation de la gélose Muller
Hinton
La gélose MH a été préparé
selon les recommandations du fabriquant et stérilisée à la
plaque chauffante pendant 15mn. Après stérilisation, elle a
été autoclavée dans un bain-marie à environ
45°C. L'épaisseur de la gélose était de 4mm, ce qui
correspond à un volume de 22,5 ml pour une boite de pétri avec un
diamètre de90mm. Les boites de pétri ont été
ensuite déposées sur une table à niveau pour la
solidificationpuis s'ensuit le séchage à l'étuve.
3.4.4 Préparation de
l'inoculum
A partir d'une culture de 18 à 24 heures sur la
gélose MH, des colonies pures de la souche à étudier ont
été mises en suspension bactérienne directement en
solution salée (5ml d'eau physiologique) puis
homogénéisées à l'aide d'un vortex. La
densité du mélange a été ajustée à
l'aide d'un densitomètre de sorte à obtenir une turbidité
équivalente de l'étalon 0,5 Mc-Farland, ce qui correspond
à un inoculum d'environ   UFC/ml pour Escherichia coli. L'inoculum a été
ajusté en ajoutant une colonie si la suspension bactérienne n'a
pas atteint une turbidité de 0,5 MacFarland ou en ajoutant l'eau
physiologique stérile si la suspension était plus dense.
3.4.5 Ensemencement de
l'inoculum
Un écouvillon stérile a été
trempé dans la suspension bactérienne, puis pressé contre
la paroi interne du tube. L'étalement se fait en frottant
l'écouvillon sur toute la surface de la gélose de haut en bas en
stries serrées et répété2 fois en tournant la boite
de pétri à un angle de 60° de chaque côté de la
boite afin d'obtenir une distribution homogène de l'inoculum (CLSI,
2010). L'application de disque se fait 5 à 10 minutes à une
température ambiante (25°C) après ensemencement. Les boites
de pétri ont été séchées à
l'étuve à 37°C pendant 24heures.
3.4.6 Choix des disques
Quatorze antibiotiques ont été testés.
Ces antibiotiques sont généralement actifs sur les
entérobactéries et sont utilisés couramment en
antibiothérapie probabiliste des infections dues aux
entérobactéries particulièrement les
gastroentérites. Ces antibiotiques étaient les suivantes :
Ampicilline (25ug ;Amikacine (25ug), Amoxicilline+acide clavulanique
(20/10ug), Ceftriaxone (30ug), Triméthoprime Sulfamides (30ug),
,Céfamadole (30 ug), Imipénème (10ug), Aztreonam (10ug),
Norfloxacine (10ug), Colistine (30ug), Acide Nalixidique (30ug), Ciprofloxacine
(5ug), Ofloxacine (5ug) Chloramphénicol (25ug).
| 
