A - Les flavonoïdes
La méthode utilisée est celle dite
(réaction de SHIBATA)
- Mettre 2 ml d'extrait aqueux à 10% dans un tube
à essai
- Ajouter 5 ml d'alcool chlorhydrique (4 ml et OH + 1 ml HCl
concentré) et 2 ou 3 copeaux de magnésium. Une coloration rose
orangé ou violacée apparaissant lorsqu'il y a des
flavonoïdes.
B - Les tanins
La réaction effectuée est l'action de chlorure
ferrique (FeCl3) 5% sur l'extrait aqueux à 10%, l'apparition d'une
coloration bleu noire ou verte dénotant la présence de tanins.
(HARBORNE, 1968 ; RIBEREAU- GAYON, 1968)
1.2.2.3- Les alcaloïdes
2 ml d'une solution d'extrait à 10% dans l'eau
additionnée d'une goutte de HCl concentré et 3 gouttes de
réactif de Mayer. Pas de formation d'une précipitation jaune
blanche signifie l'absence d'alcaloïdes.
1.2.2.4- Cardénolides
5 g de miel sont macérés avec 20 ml d'eau
distillée dans trois bicher différents, 10 ml de filtrats est
mélangé avec 10 ml de (CHCl3, et éthanol). La phase
organique est évaporée, et est dissous dans 3 ml d'acide
acétique, simultanément alors a déplacé à
une éprouvette.on ajoute quelques gouttes de FeCl3, et a suivi en
ajoutant 1 ml d'acide sulfurique concentré. Les solutions ne sont pas
colorées par une couleur verte bleu indique l'absence de
cardénolide.
1.2.2.5- Stéroïde
5 g de miel étudie sont extrait avec 70%
d'éthanol, l'extrait de l'alcool s'est évaporé et est
dissous dans CHCl3. Le filtrat est divisé en deux tubes :
- dans la première, 1 ml de solution acétique
est ajouté suivi par 1 ml de H2SO4 concentré. Si la
solution ne donne aucune couleur verte ceci prouve la présence de
stéroïdes, non saturés. - dans le deuxième tube, le
même volume de H2SO4 est ajouté. La couleur jaune n'est
pas transformée à la couleur rouge, ceci indique l'absence de
dérivés des stéroïdes.
1.2.3- L'extraction des flavonoïdes
La procédure suivie est celle appliquée dans le
laboratoire Biochimie des milieux désertiques, selon les données
de la littérature.
1.2.3.1- L'extraction Liquide-Liquide
L'extraction liquide-liquide est un procédé
physique permettant la récupération ou la purification d'un
composé en utilisant les différences de solubilités
mutuelles de certains liquides.
D'abord, on prépare une solution (1) contient 100 mg de
l'échantillon (E1) avec 300 ml d'eau distillée. Laisser
macérer à 24 heures. On fait la filtration de l'extrait
obtenu.
On extraire le filtrat trois fois par 100 ml de chloroforme.
On obtient une phase organique (On sèche les phases organiques par
l'appareil évaporotateur rotatif pour obtenir des extraits bruts pour
lesquelles on fait l'activité antibactérien.) et une phase
aqueuse.
On extraire la dernière phase trois fois par 100 ml
d'acétate d'éthyle. On répète ces étapes
pour les deux autres échantillons de miel (E2.E3). 1.2.3.2-
L'extraction Méthanol-Eau
Parallèlement à l'extrait (1), on
prépare un autre extrait (2) qui contient 100 mg de (E1) avec 300 ml de
méthanol a une dilution 80% (c'est à dire : 80 ml de
méthanol dans 20 ml d'eau distillé).
On répète toujours cette étape pour les
autres échantillons E2E3.
On met les extraits obtenus dans trois boites de Pétri
différentes pour laisser évaporer attentivement par l'air
libre.
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