1.2.4- Etude du pouvoir antibactérien du
miel
La méthode d'évaluation du pouvoir
antimicrobien de miel a porté sur une technique standard simple, rapide,
économique et faible.
La méthode des aromatogrammes est la technique choisie
pour déterminer l'activité antibactérienne a
été réalisée au niveau de laboratoire de biochimie
et de microbiologie du département des Sciences de la Nature et de la
Vie. Cette méthode repose sur le pouvoir migratoire des extraits
à l'intérieur d'une boite de Pétri, dans un milieu
nutritif solide.
Le milieu de culture utilisé est la gélose
Muller-Hinton (4mm d'épaisseur) en
surfusion est coulé dans des boites de Pétri.
L'ensemencement de l'inoculum de 1ml est réalisé
en surface (ensemencement en nappe) après la solidification du milieu.
Le surplus d'eau est évaporé dans l'hotte jusqu'à ce que
la gélose soit sèche. Les disques d'aromatogrammes dont le
diamètre est de 0.5 cm sont imprégnés dans des dilutions
(A, B, C, et D) des extraits étudiés et disposés à
la surface des boites en appuyant légèrement à l'aide
d'une pince stérile. Chaque disque est imprégné d'une
quantité variable (25 ul à 100 ul) de l'extrait
sélectionné. Les dilutions (A, B, C, et D) sont respectivement
(25%, 50%, 75% et 100%).
25% = (25 d'extrait et 75 de solvant) 50% = (50 d'extrait et
50 de solvant) 75% = (75 d'extrait et 25 de solvant) 100% = extrait pur
La boite est ensuite fermée et incubée dans
l'étuve à 37° 12 à 18 heures. Après
l'incubation, l'absence de la croissance bactérienne se traduit par un
halo translucide autour du disque, identique à celui de la gélose
stérile. On a utilisé 4 dilutions, 4 extraits, avec 2
répétitions.
On a fait les mêmes étapes pour chaque souche
bactérienne et chaque échantillon de miel
étudié.
Les dilutions de l'extrait se font comme suivant :
· Méthanol pour l'extrait chloroformique et
l'extrait d'acétate d'éthyle.
· L'eau distillée pour l'extrait aqueuse et hydro
alcoolique.
* Lecture
Elle consiste à mesurer avec précision les
diamètres des zones d'inhibition qui apparaissent autour des disques
d'aromatogramme à l'aide d'une règle graduée. Une
bactérie est considérée sensible si le diamètre de
la zone d'inhibition est supérieur à 0.5 cm (Hamoudi,
2008). Cette sensibilité augmente en fonction du
diamètre de cette zone d'inhibition.
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